浙江省市场监督管理局拟批准发布《猫细小病毒 PCR 检测方法》省级推荐性地方标准,根据《浙江省地方标准管理办法》的规定,现公开征求社会各界对标准报批文本的意见,公开征求时间截止2020年6月28日。有关单位和个人如有意见建议,可通过来信、来电、来访等形式,向浙江省市场监管局标准化处反映。单位反映的意见建议请加盖单位公章,个人反映的请署真实姓名。逾期不再接受意见建议。
联系人:浙江省市场监督管理局标准化处 浙江省市场监督管理局地方标准技术审查部 电子邮件:zjbz2012@126.com
节选该标准部分内容:
规范性引用文件:《GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法》。
仪器设备
1、高速冷冻离心机:要求最大离心力在 12 000rpm 以上。
2、PCR 扩增仪。
3、核酸电泳仪和水平电泳槽。
4、微波炉。
5、分析天平。
6、恒温水浴锅。
7、冷藏冰箱和低温冷冻冰箱。
8、微量移液器。
9、凝胶成像系统(或紫外透射仪)。
10、高压灭菌锅。
11、超净工作台或生物安全柜。
样品的采集和处理
采集动物粪便、肛拭子、全血或肠道等组织样品并进行处理:
a) 肛拭子、粪便(加适量 PBS)等样品经 4 ℃ 5 000 rpm/min 离心 2 min,取上清液;
b) 全血样品待血凝后经 5 000 rpm/min 离心 2 min,取血清;
c) 取 0.1 g 肠道等样品与灭菌 PBS(全称、浓度)按 1:5 的重量体积比制成悬液,匀浆后,反复冻融 3 次,在涡旋混合器上混匀后经 4 ℃ 5 000 rpm/min 离心 10 min,取上清液。
制备的样品在 2 ℃~8 ℃保存时间不应超过 24 h,长期保存应分装成小管,置于-20 ℃以下,避免反复冻融。
PCR 反应
反应体系组成
设立阳性对照和阴性对照。按表 1 所述反应体系组成,严格在冰盒上配置 25 µL PCR 扩增体系。
电泳
盖好电泳仪,插好电极,5 V/cm 电压电泳,30 min~45 min(指示试剂跑至 1/3 处)。
结果观察
用紫外凝胶成像仪或者紫外透射仪观察扩增结果。