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色谱柱常见问题

2020-07-25IP属地 广西00
会使用色谱仪,不代表对了解色谱仪,尤其是色谱仪的各种配件。色谱柱作为色谱系统的心脏,越了解它,就能更好的掌握色谱仪。
 
1、柱子才用了四个月出现峰形拖尾现象,是什么原因?
 
用了四个月峰形拖尾是很正常的,需要维护清洗一下色谱柱,清除引起拖尾的柱头污染。如果柱头塌陷,可以从其它废柱子里取点填料填补塌陷,但效果不一定好。
 
2、流动相里有酸,单纯用乙腈冲洗能把酸冲洗干净吗?
 
流动相里有酸,应该先用纯水或80:20的水/乙腈溶剂冲洗。如果一直在酸性环境,固定相容易流失,造成保留时间前移和其它色谱性能下降。
 
3、C18和RP18有什么区别,在检测三聚氰胺时为什么结果响应值不同?
 
RP18就是C18。不过C18柱之间也有区别,测定三聚氰胺一般要用极性比较大的水性C18柱。
 
4、磺化交联的苯乙烯-二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱没有储存冰箱中,发霉后可以将此色谱柱修复好吗?
 
聚合物柱子因为不怕酸碱,就直接用强酸强碱清洗。如果是H型,用1M硫酸冲洗;如果是Ca型,可以先用1M硫酸冲洗,再用EDTA钙盐转换回Ca型柱;如果是中性的聚合物反相柱,直接用1M的NaOH冲洗。
 
5、柱子的柱效影响大吗?一般柱子的柱效规定是多少?
 
柱效是柱子性能好坏的一个重要体现指标。柱效会影响分离度,当然是峰形越尖锐,柱效越高,和其它峰越容易分开。另外柱效高峰形尖锐,对峰面积的积分误差就小,甚至可以用峰高来定量。一般C18柱,在测定甲苯等不易拖尾的小分子中性不电离物质时,5um的填料,每米的柱效能达到80000以上的塔板数,就算合格。在实际分析物的测定时,一般药典有规定最低柱效是2000-3000,新柱子的柱效都高于这个数。
 
6、流动相中加入四氢呋喃对柱子有损害吗?
 
四氢呋喃(THF)是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂。在流动相中加入THF能改善某些难分离的物质对的分离度,但THF不稳定,容易降解生成具有很强反应活性的过氧化物,能与分析物反应生成新化合物,导致拖尾、峰分裂和鬼峰产生。
 
THF对柱子有损伤这点是无疑的,但这种损伤是随时间累积的。THF放得越久,产生的过氧化物含量越大,因此应该避免使用生产很久的THF溶剂,而且最好将THF冷藏、干燥和避光保存,使用前检测一下过氧化物的含量。
 
7、哪些原因会造成色谱峰变宽、峰高变低?
 
如果其它色谱条件没有改变,柱效下降是导致峰变宽的主要原因。对于易电离的极性物质,如果流动相pH选择不合适,分析物既有中性分子态存在,又有离子态存在,峰也会变宽变矮。色谱柱使用后柱效逐步下降是正常现象,如突然降低则属异常,多半是因为使用不当,造成填料特性或柱床结构改变所致。
来源:化工仪器网 
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